Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Содержание

Подсчет лейкоцитов в камере Горяева

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Подсчет лейкоцитов в камере Горяева – это один из способов определения их количества в крови пациента.

Число лейкоцитов зависит от множества факторов, к которым следует отнести скорость образования, выделение из костного мозга, уничтожение. На все перечисленные процессы оказывают непосредственное влияние физиологические факторы.

Поэтому постоянная смена числа лейкоцитов у здорового человека возможна. Особенно это видно, если сравнивать результаты утренних и вечерних анализов.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Данный пробирочный метод состоит из следующих этапов:

  1. Пробирка заполняется уксусной кислотой с тиазиновым красителем на 0,4 мл. С помощью капиллярной пипетки берется 20 мкл свежей крови и выдувается в эту же пробирку. Полученная смесь тщательно смешивается.
  2. Тонкая стеклянная пластинка, находящаяся в камере, тщательно вытирается, после чего образуются радужные разводы.
  3. Далее берется капля полученного раствора из крови с уксусной кислотой и подносится к краю пластинки.
  4. Когда камера будет заполнена, ее не беспокоят в течение одной минуты, чтобы белые клетки крови начали оседать.
  5. При малом увеличении производится подсчет лейкоцитов.

Чтобы получить верные результаты, используют специальную формулу для подсчета количества лейкоцитов в 1 мкл крови. Нормой считается показатель от 4 до 9 на 10 л.

Если получился результат, превышающий данную отметку, то пациенту ставится диагноз — лейкоцитоз. Если наблюдается снижение – лейкопения. Но это в теории, на деле нужно смотреть и на другие показатели, чтобы точно определить заболевание.

Для подсчета лейкоцитов используют три вида формул:

N = m x 4000 x 20/(64 x 16) = m x 78.13 ≈ m x 78

N = m x 4000 x 20 / (169 x 16) ≈ m x 29.6

N = m x 4000 x 20 / (100 x 16) ≈ m x 50.

Камера Горяева – это прибор, который может наиболее точно подсчитать число лейкоцитов, а также других подобных частиц. В ее состав входит специальное толстое стекло с прямоугольной камерой. На ней расположена микроскопическая сетка и тоненькое оптическое стекло.

Этот аппарат разрабатывал известный профессор Горяев Николай Константинович, который трудился в Казанском университете. Его специфическая сетка давала наиболее точные результаты, чем камеры других известных ученых.

Что касается обслуживания камеры, то здесь тоже существуют свои нюансы. В перерывах от работы камера Горяева должна находиться в сухой зоне. Когда работа завершена, ее нужно обработать.

Для этого аппарат погружают в этиловый спирт (70%) на полчаса. Другой вариант очистки – это раствор формалина (4%) на один час.

Завершающим этапом становится промывка камеры Горяева дистиллированной водой и протирка мягкой тканью.

Существуют случаи, когда при низких показателях в организме пациента все в порядке. Это говорит о том, что основной резерв лейкоцитов находится в тканях. У таких людей предрасположенность к различным заболеваниям очень низка, поэтому они редко болеют. В основном это наследственность.

Лейкопения и лейкоцитоз

Предположить, что у пациента диагноз лейкопения, можно также с помощью камеры Горяева. Ее делят на органическую и функциональную.

К функциональным отклонениям относят:

  • заболевания, носящие вирусную или бактериальную этиологию (кишечные инфекции, гепатит А и другое);
  • реакция на некоторые медикаменты;
  • при сильной нагрузке на мышцы, стрессы, диеты;
  • при неправильном хранении крови.

К органическим причинам можно отнести:

  • панмиелофтиз;
  • лейкоз;
  • болезнь Ходжкина;
  • ревматическая болезнь;
  • облучение ионами;
  • агранулоцитоз.

Лейкоцитозом организм отвечает в том случае, когда на него оказывают влияние эндогенные и экзогенные факторы. На практике выделяют физиологическую, а также патологическую формы болезней.

К физиологическим причинам можно отнести:

  • переваривание пищи – в этот период значение лейкоцитов резко растет, но через три часа все приходит в норму;
  • стресс, нервы, физический труд, переохлаждение или перегрев, беременность с третьего месяца, менструация.

К патологическим причинам относят:

  • рак крови;
  • попадание в организм некоторых инфекций, а также воспаление (сепсис);
  • радиация, отравления организма различными ядами, в том числе насекомых;
  • действие некоторых лекарственных препаратов (нейромедиаторы, биогенный амин, стероидные гормоны и другое);
  • некроз тканей, серьезные болезни сердца, гангрены, почечная кома;
  • обильные кровотечения (получение серьезных ран, операции в гинекологии и так далее).

Чтобы не запускать болезнь, необходимо регулярно посещать плановые осмотры и сдавать необходимые анализы. Упущенное время способно погубить здоровье или забрать драгоценную жизнь.

Источник: http://BolezniKrovi.com/analizy/podschet-lejkotsitov-v-kamere-goryaeva.html

Взятие крови и подсчет эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

  1. Смесители для эритроцитов и лейкоцитов.
  2. Пробирки типа серологических.
  3. Пипетки на 1 и 5 мл.
  4. Капилляры к гемометру Сали.
  5. Стеклянные палочки.
  6. Глазные пипетки.
  7. Счетные камеры Горяева со шлифованными стеклами к ним.
  8. Микроскопы.
  9. Колбочки с чистой водой.
  10. Поваренная соль.
  11. Сулема.
  12. Сернокислый натрий.
  13. Ледяная уксусная кислота.
  14. 96° этиловый спирт.
  15. Генцианвиолет (метиленовая синька).
  16. Набор для взятия крови из пальца.

Взятие крови в смесители для подсчета эритроцитов и лейкоцитов

Для подсчета количества эритроцитов и лейкоцитов необходимы следующие реактивы:

  1. 3% раствор хлористого натрия (NaCl) : 3 г хлористого натрия помещают в колбочку на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.
  2. Реактив Гайема: к 0,5 г сулемы, 1 г хлористого и 5 г сернокислого натрия приливают 200 мл дистиллированной воды. Оба реактива сохраняют эритроциты.
  3. 3% раствор уксусной кислоты – 3 мл ледяной уксусной кислоты помещают в цилиндр на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки. Реактив подкрашивают 1% водным раствором генцианвиолета из расчета 5-6 капель краски на 10 мл 3% уксусной кислоты.

Кровь для подсчета эритроцитов и лейкоцитов берут в специальные смесители или в пробирки.

На чистый и сухой смеситель для эритроцитов надевают резиновую трубочку со стеклянным мундштуком, после чего в него насасывают кровь, без пузырьков воздуха, точно до метки 0,5, затем этим же смесителем набирают 3% раствор хлористого натрия или реактив Гайема точно до метки 101, не допуская появления пузырьков воздуха.

При этом кровь разводится в 200 раз. Со смесителя снимают резиновую трубочку, захватывают его между пальцами, несколько раз встряхивают, прокалывают им бумажку, на которой указана фамилия больного, и кладут его на стол в горизонтальном положении.

В чистый сухой смеситель для лейкоцитов таким же способом, как и в смеситель для эритроцитов, насасывают кровь до метки 0,5, после чего тем же смесителем набирают 3% раствор уксусной кислоты до метки 11.

При этом кровь разводится в 20 раз.

Затем со смесителя снимают резиновую трубочку, несколько раз встряхивают его, прокалывают им бумажку, на которой указана фамилия больного, и кладут на стол в горизонтальном положении.

Взятие крови в пробирки для подсчета эритроцитов и лейкоцитов по Н. М. Николаеву

Для каждого взятия крови берут две нумерованные пробирки, серологическую и агглютинационную. В серологическую пробирку помещают 4 мл 3% раствора хлористого натрия или реактива Гайема, а в агглютинационную – 0,4 мл 3 % раствора уксусной кислоты. В каждую пробирку вносят по 0,02 мл крови, взятой капилляром от гемометра, и тотчас же смешивают содержимое пробирок, вращая их между ладонями.

В серологической пробирке (для эритроцитов) получают разведение крови в 200 раз, а в агглютинационной (для лейкоцитов) – в 20 раз.

Изучение счетной камеры Горяева и заполнение ее кровью для подсчета эритроцитов и лейкоцитов

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в специальных счетных камерах. Для этой цели пользуются счетной камерой Горяева, которая представляет собой стекло с нанесенными на него двумя сетками.

Сетки отделены одна от другой углублениями и делятся разграничительными линиями на 225 квадратов. Площадь сетки 9 мм2, высота, создающаяся при притирании шлифованного покровного стекла в камере, 0,1 мм, объем 0,9 мм3.

Перед заполнением камеры кровью ее моют водой и насухо вытирают.

К сухой поверхности камеры притирают шлифованное покровное стекло, плавно продвигая его по ней взад и вперед до появления цветных колец Ньютона в местах соприкосновения покровного стекла со стеклом камеры.

Затем кровь в смесителе встряхивают в течение 1-2 минут, после чего из смесителя выпускают на ватку 1-2 капли крови, следующую каплю помещают перед шлифованным покровным стеклом.

При нанесении капли крови надо следить за тем, чтобы в пространство над сеткой камеры не попал воздух и чтобы не было избытка жидкости. Одну сетку заполняют для подсчета эритроцитов, вторую – для подсчета лейкоцитов.

Для заполнения камеры Горяева кровью, взятой по способу Н. М. Николаева (пробирочный метод), поступают следующим образом. К счетной камере притирают шлифованное стекло.

Из каждой пробирки, предварительно встряхнув ее, с помощью стеклянной палочки с оплавленным концом берут по одной капле жидкости и заполняют ими раздельно обе сетки камеры, для чего каплю помещают перед щелью, образующейся между шлифованным стеклом и счетной камерой, в результате чего жидкость заполняет пространство над сетками.

Подсчёт эритроцитов и лейкоцитов в счетной камере Горяева

Количество эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева подсчитывают с помощью микроскопа. Для этого заполненную разведенной кровью камеру Горяева помещают на предметный столик микроскопа и под малым увеличением (окуляр 15 X или 10Х, объектив 8Х), с опущенным конденсором находят сетку камеры. К подсчету форменных элементов приступают через 2-3 минуты после заполнения камеры кровью.

Эритроциты подсчитывают в пяти квадратах, каждый из которых разделен на 16 маленьких квадратиков. Подсчет начинают с левого верхнего квадрата, а затем продвигают камеру по диагонали сверху вниз.

Во избежание повторного подсчета одних и тех же эритроцитов руководствуются следующим правилом: все эритроциты внутри квадратика и на разграничительных линиях подсчитывают только тогда, когда они большей своей половиной заходят внутрь квадратика; клетки, пересеченные разграничительной чертой пополам, подсчитывают лишь на двух сторонах из четырех сторон квадрата (на левой и верхней); клетки, выходящие большей своей половиной за пределы разграничительных линий, совсем не считают.
Результаты подсчета эритроцитов по каждому из пяти больших квадратов записывают и суммируют. Для расчета количества эритроцитов пользуются следующей формулой:

где х — количество эритроцитов в 1 мм3 крови; а — сумма эритроцитов, подсчитанных в пяти квадратах; б — разведение крови в 200 раз; в — количество сосчитанных маленьких квадратиков — 80.

Для упрощения расчета к количеству подсчитанных эритроцитов приписывают четыре нуля.В норме количество эритроцитов от 4 500 000 до 5 000 000 в 1 мм3 крови. Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах.

При подсчете их руководствуются теми же правилами, которые указаны для эритроцитов, а затем производят расчет по приведенной выше формуле, в которой цифра разведения равна 20, а количество подсчитанных квадратов — 1600.

Для простоты расчета количество подсчитанных лейкоцитов умножают на 50 или делят на 2 и приписывают два пуля.

В норме количество лейкоцитов от 5000 до 8000 в 1 мм3 крови.

Источник: http://ginekolog.my1.ru/publ/klinicheskie_issledovanija/blood/podschet_ehritrocitov_i_lejkocitov_v_schetnoj_kamere/39-1-0-756

Анализ мочи по Нечипоренко

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Анализ мочи по Нечипоренко в отечественной лабораторной диагностике является наиболее распространенным методом количественного определения форменных элементов в моче.

Этот метод наиболее прост, доступен любой лаборатории и удобен в амбулаторной практике, а также имеет ряд преимуществ перед другими известными количественными методами исследования осадка мочи.

По методу Нечипоренко определяют количество форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров) в 1 мл мочи.

Подготовка пациента

Специальной подготовки для исследования мочи по методу Нечипоренко не требуется.

Сбор мочи

Для анализа мочи по методу Нечипоренко собирается только средняя порция (в середине мочеиспускания) первой утренней мочи (достаточно 15 – 20 мл). На это обязательно следует указать пациенту. При этом необходимо соблюдать основные правила сбора мочи. Моча сразу же доставляется в лабораторию.

В стационаре для уточнения топической диагностики для исследования мочи по методу Нечипоренко может быть использована моча, полученная при раздельной катетеризации мочеточников.

Оборудование:

  • мерная центрифужная пробирка,
  • пипетка на 10 мл,
  • счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера),
  • стеклянная палочка,
  • микроскоп.

Ход исследования:

Доставленную мочу хорошо перемешивают, отливают 5 – 10 мл в центрифужную градуированную пробирку и центрифугируют 3 мин при 3 500 об/мин, отсасывают верхний слой мочи, оставляя 1 мл вместе с осадком. Хорошо перемешивают осадок и заполняют камеру Горяева или любую счетную камеру.

Обычным способом во всей сетке камеры подсчитывают число форменных элементов (раздельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров) в 1 мм3 осадка мочи (x).

Установив эту величину и подставив ее в формулу, получают число форменных элементов в 1 мл мочи:
  N = x*(1000/V), где
N – число лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мл мочи,
x – число подсчитанных лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мм3 (1 мкл) осадка мочи (при подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0,9, где H – количество подсчитанных в камере клеток, а 0,9 – объем камеры, а при подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3),
V – количество мочи, взятой для исследования (если моча берется катетером из лоханки, то V обычно меньше 10), 1000 – количество осадка (в кубических миллиметрах).

Примечание. Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи.

Нормальные значения форменных элементов для метода Нечипоренко

Для метода Нечипоренко нормальным считается содержание в 1 мл мочи лейкоцитов до 2000, эритроцитов – до 1000, цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более одного на камеру Фукса-Розенталя или на 4 камеры Горяева. Цифры одни и те же для взрослых и детей, для лоханочной и пузырной мочи.

Преимущества метода Нечипоренко

  • технически прост, удобен, доступен;
  • не обременителен для обследуемого и персонала, так как не требует дополнительной подготовки пациента, сбора мочи за строго определенное время;
  • для исследования может быть использована средняя порция мочи (что исключает необходимость катетеризации мочевого пузыря) и моча, полученная из почек при раздельной катетеризации мочеточников для уточнения топической диагностики;
  • не требует большого количества мочи – определение лейкоцитурии можно проводить в небольшом количестве мочи, полученной из почки;
  • по количественным показателям не уступает другим методам;
  • легко выполним в динамике;
  • является унифицированным методом.

Недостаток метода Нечипоренко

При исследовании мочи по методу Нечипоренко не учитываются суточные колебания выделения форменных элементов с мочой.

Клиническое значение метода Нечипоренко

Анализ мочи по Нечипоренко позволяет выявить скрытую лейкоцитурию, которая часто наблюдается при хронических, скрытых и вялотекущих формах гломерулонефрита и пиелонефрита и не обнаруживается при ориентировочной микроскопии осадка мочи.

Метод используется для диагностики заболеваний почек. Так, преобладание эритроцитов над лейкоцитами характерно для хронического гломерулонефрита и артериосклероза почек, а преобладание лейкоцитов – для хронического пиелонефрита. Необходимо помнить, что при наличии калькулезного пиелонефрита в осадке могут преобладать эритроциты.

Неоднократное проведение исследования мочи по методу Нечипоренко в процессе лечения позволяет судить об адекватности назначенной терапии и помогает в случае необходимости скорректировать ее.

При диспансерном наблюдении метод Нечипоренко позволяет следить за течением заболевания и своевременно назначать терапию в случае обнаружения отклонений от нормы.

Метод Нечипоренко в модификации Пытель А. Я

В детской и урологической практике, при диспансеризации широко применяется метод Нечипоренко в модификации Пытель А. Я.

Сбор мочи и оборудование те же, что и при обычном методе Нечипоренко, отличие заключается в самом подсчете форменных элементов (подсчет форменных элементов осуществляется в камере Горяева, но не во всей, а только в 100 больших квадратах), в связи с чем нормальное количество лейкоцитов для данного метода отличается от такового при классическом методе Нечипоренко и это следует учитывать врачу при интерпретации полученных данных.

Ход исследования

Мочу хорошо перемешивают, наливают 10 мл в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин. Удаляют верхний слой, оставляя 1 мл мочи вместе с осадком.

Хорошо перемешивают осадок, заполняют камеру Горяева и производят подсчет раздельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров в 100 больших квадратах (1600 малых квадратов). Учитывая, что объем малого квадрата равен 1/4000 мм3.

Подсчет форменных элементов в 1 мм3 производят по следующей формуле:

x = (a*4000)/(b*c),

где:
x – количество форменных элементов в 1 мм3 мочи,
a – количество форменных элементов в 100 больших квадратах,
b – количество малых квадратов, в которых производился подсчет,
c – количество мочи, взятой для центрифугирования (в миллилитрах).

При умножении полученного числа на 1000, узнают количество форменных элементов в 1 мл мочи:

K = (a*4000*1000)/(1600*10) = a*250,

где:
K – количество форменных элементов в 1 мл мочи,
a – количество форменных элементов в 100 больших квадратах.

При получении небольшого количества мочи в случае катетеризации мочеточника число форменных элементов подсчитывают в 1 мл нецентрифугированной мочи, используя ту же формулу, но исключая в знаменателе c. Тогда формула будет иметь следующий вид:

K = (a*4000*1000)/b = (a*4000*1000)/1600=a*2500.

Нормальные значения

В норме при подсчете форменных элементов в моче по методу Нечипоренко в модификации Пытель в 1 мл мочи содержится лейкоцитов – до 4000, эритроцитов – до 1000, цилиндров – до 20.

Клиническое значение методов количественного определения форменных элементов в моче.

  • Иванова В. Н., Первушин Ю. В. и соавторы, “Методы исследования мочи и клинико-диагностическое значение показателей состава и свойств мочи” – Методические рекомендации, Ставрополь, 2005 г.
  • Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е. А. Кост. Москва “Медицина” 1975 г.
  • Козловская Л. В., Николаев А. Ю. Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования – Москва, Медицина, 1985 г.
  • Краевский В. А. Атлас микроскопии осадков мочи. Москва, «Медицина», 1976 г.
  • Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике под редакцией Базарновой М. А., Морозовой В. Т. – Киев, “Вища школа”, 1988 г.
  • Справочник “Лабораторные методы исследования в клинике” под ред. проф. В. В. Меньшикова. Москва, “Медицина”, 1987 г

Источник: http://www.clinlab.info/Urinalysis/Nechiporenko-method-44

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева, нормы показателей и отклонения

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Камера Горяева – это приспособление для измерения числа клеток и частиц в определённом объёме жидкости (кровь, моча), состоящее из специального толстого предметного и покровного стёкла.

Предметное стекло имеет углубленную площадку посередине, на которую нанесена сетка из 225 больших квадратов. Из этих квадратов 25 равномерно разделены на 16 меньших квадратов. Благодаря такому объёму сетки подсчёт выполняется точнее, нежели в других ручных счётных устройствах.

Камера Горяева

Обслуживание камеры

После использования инструмента предметное стекло дезинфицируют путём погружения в 4% раствор формалина на час или в 70% раствор этилового спирта на полчаса.

После этого камеру тщательно промывают дистиллированной водой. Излишек жидкости убирают мягкой салфеткой.

Стоит обратить внимание на то, что камеру нельзя протирать ватным тампоном из-за цепляющихся к ней волокон. Хранится стекло в сухом месте.

Правило Егорова

Во время использования камеры в подсчитываются те ФЭ, которые располагаются внутри квадрата сетки и на верхней и левой линии его периметра. При этом частицы, касающиеся правой и нижней линии периметра во время расчёта данной клетки не включаются.

Методика подсчёта лейкоцитов

Подсчёт количества лейкоцитов начинается с разведения крови в 3-5% растворе этановой кислоты с метиловой синью в 20 раз. Рабочий материал перед применением протирают марлей насухо.

Покровное стекло нужно протереть до возникновения цветных колец Ньютона. Далее, камеру заполняют разведённой кровью, при этом первые две капли выпускают на фильтровальную бумагу.

Жидкость попадает в камеру благодаря капиллярному свойству воды. Важно проследить, чтобы в желобки при заполнении ничего не затекало. Если это произошло, жидкость аккуратно убирают фильтровальной бумагой.

Затем оставляют сетку в покое на минуту, ожидая, пока ФЭ остановят своё движение.

Подсчёт лейкоцитов осуществляется в пределах ста больших квадратов при малом увеличении, то есть при окуляре 10х и объективе 8х, по правилу Егорова. Полученная цифра используется в формуле.

Х = (n× 250 × 20) / 100 или Х = n × 50

Х – количество лейкоцитов.

n – число, полученное в результате подсчёта в камере.

Количество лейкоцитов определяют, принимая во внимание число больших квадратов сетки – 100 и разведение крови – 20.

Как происходит подсчет лейкоцитов

Норма лейкоцитов и отклонения

Норма лейкоцитов у людей составляет 4,0 – 9,0 × 10⁹/л. Или, по-другому, в 1 кубическом мм крови располагается примерно 6000 белых кровяных клеток.

На отклонения от нормы могут влиять внешние физиологические факторы:

  • приём пищи перед сдачей крови;
  • стресс;
  • беременность или менструация у женщин;
  • переохлаждение или перегрев;
  • большая физическая нагрузка перед сдачей анализов.

Если количество белых кровяных клеток превышает 9,0 × 10⁹/л (повышены лейкоциты), такое состояние называется лейкоцитозом. Подобную картину можно увидеть при злокачественных заболеваниях крови, инфекциях, поражениях радиацией и отравлениях.

Лекарственные препараты тоже способны увеличить количество лейкоцитов. Некроз тканей, обильные кровотечения, в том числе в результате операций, почечная кома, болезни сердца – всё это может привести лейкоцитозу.

Падение количества лейкоцитов ниже 3,9 × 10⁹/л называется лейкопенией. Однако у некоторых людей фиксируется постоянное число лейкоцитов в количестве 3,5 × 10⁹/л.

Принято считать, что у таких людей сохраняется резерв этих клеток в тканях в 50 раз больше, нежели в крови.

Еще встречается функциональная лейкопения после введения анальгетиков, сульфаниламидов и других лекарственных препаратов, после долгой мышечной работы, в результате поражения инфекциями и вирусами (тиф, грипп, корь).

Лейкоцитарная формула

Все виды лейкоцитов составляют лейкоцитарную формулу. По ней можно выявить определённые патологии. Нормы формулы меняются в зависимости от возраста и периода жизни человека. Сдвиг хорошо заметен у женщин во время беременности или после родов.

Применяются разные способы подсчёта соотношения видов этих клеток, но все они связаны с тем, что более тяжелые клетки (базофилы, например) располагаются ближе к краю мазка, а лимфоциты, как легкие клетки, остаются в середине.

  • Метод Филипченко. В данном способе подсчёт осуществляется по поперечной прямой границы одного конца к другому. Мазок при этом мысленно разделяют на три части.
  • Метод Шиллинга. Лейкоциты подсчитывают в четырех участках мазка.

Полученные данные записываются в таблицу. Индивидуально количество каждого вида белых клеток крови высчитывается по формулам. Отмечаются те элементы, которые попали в поле зрения. Счёт ведётся до того, момента, пока сумма всех подсчитанных клеток не составит 100.

Методика подсчёта лейкоцитов в моче

В моче подсчитывается количество лейкоцитов в камере Горяева по Нечипоренко. Этот анализ нужен для мониторинга заболеваний почек. Периодическое исследование мочи помогает проследить за правильностью лечения и эффективностью назначенной терапии.

Методика расчета

10 мл свежесобранной мочи центрифугируют в течение трёх минут при 2,5 тыс. оборотов в минуту. Перед этим необходимо проследить, чтобы моча, во избежание частичного распада клеток, имела слабокислую реакцию.

При помощи пипетки с узким оттянутым концом убирают верхний слой. В пробирке оставляют от 0,5 мл мочи до 1 мл в зависимости от объёма осадка.

Осадок аккуратно перемешивают с надосадочной жидкостью. Полученным раствором заполняют счётную камеру Горяева по схожему принципу, что используется при подсчёте ФЭ крови. Камеру оставляют в покое от 3 до 5 минут.

Лейкоциты необходимо подсчитать в больших квадратах по всей сетке с окуляром 7х и объективом 40х.

Полученная цифра используется в формуле:

Х = (а/0,9) × (1000/V)

Х – число лейкоцитов в 1 мл мочи.

а – подсчитанное количество, делённое на объём камеры в 1 мкл осадка мочи.

v – Количество мочи, взятой для исследования.

1000 – количество осадка.

Это важно! Норма лейкоцитов: в 1 мл мочи не более 2 × 10³ белых кровяных клеток.

Источник: http://LechiSerdce.ru/leykotsityi/6283-podscheta-leykotsitov-v-kamere-goryaeva.html

Камера Горяева. Практическое применение

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Лабораторная камера Горяева, названная в честь русского врача, профессора Казанского университета Горяева Н.К.

, является специальным монолитным предметным стеклом, предназначенным для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Кроме того, используя камеру Горяева можно определить увеличение микроскопа.

Камеры Горяева широко применяются в области клинических и биомедицинских исследований.

Популярные области применение камеры Горяева:

  • Подсчет форменных элементов крови
    • Подсчет эритроцитов
    • Подсчет лейкоцитов
    • Подсчет ретикулоцитов
    • И т.п.
  • Подсчет форменных элементов мочи
  • Исследование эякулята – оценка количественных и качественных параметров сперматозодиов
  • Вычисление концентрации спор в вакцине
  • Подсчет ооцист в препарате
  • И т.п.

Камеры Горяева выпускаются в двух модификациях: двухсеточные (двухкамерные) и четырехсеточные (четырехкамерные). В определении цены камеры Горяева важную роль играет качество шлифовки стекла, метод нанесения сетки – лазерная гравировка или же вакуумное напыление.

Что собой представляет камера Горяева? Камера Горяева есть не что иное, как прозрачное монолитное предметное стекло поперечными прорезями и нанесенной специальным образом микроскопической сеткой.

В случае двухкамерной камеры Горяева мы имеем четыре прорези, образующие три поперечно расположенных площадки, при этом средняя площадка разделена продольной прорезью на две одинаковых камеры, на каждой из поверхности площадки которых нанесена сетка.

В случае же четырехкамерной камеры Горяева мы получаем предметное стекло с пятью прорезями, образующих четыре площадки, при этом две внутренние дополнительно разделены продольной прорезью для получения четырех камер с нанесенной микроскопической сеткой на поверхности площадок.

Рассмотрим более подробно особенности сетки. Специальная сетка наносится на внутренние площадки, расположенные ниже соседних боковых площадок на 0.1мм. Боковые площадки предназначены для притирания покровного стекла до появления Ньютоновских колец.

Как правило, используют специальное покровное стекло для камеры Горяева с закругленными краями. После притирания покровного стекла создается камера, закрытая с двух боковых сторон, а с двух других остаются щели (так называемые, капиллярные пространства), через которые и заполняют камеру.

Что конкретно представляет собой сетка? Микроскопическая сетка камеры Горяева расчерчена на большие и маленькие квадраты, сгруппированные различными способами.

Сетка Горяева содержит 225 больших квадратов (15 рядов по 15 больших квадратов в каждом), разграфленных вертикально, горизонтально, крест-накрест и неразграфленных. При этом размеры малых делений клетки сетки составляют 0.05мм, а больших – 0.2мм. Важно, что малый квадрат со стороной 0.

05мм во всех сетках является постоянной величиной. Не трудно рассчитать, что площадь малого квадрата равна 0.0025 мм2, а большого квадрата – 0.04мм2. Тогда получаем, что объем жидкости над квадратом, образованным большими делениями сетки Горяева, составляет 0.004 микролитра.

Подсчитав количество форменных элементов (ФЭ) над большим квадратом, можно подсчитать плотность данного типа клеток в суспензии по формуле:

X=M*2.5*105

где X – количество ФЭ/мл, M- количество ФЭ над большим квадратом.

При работе с камерой Горяева важно следить, чтобы ее рабочие поверхности оставались сухими и чистыми. Кроме того, при подсчете форменных элементов нельзя допускать наличие воздушных пузырей на сетке камеры, так как они могут мешать точности подсчета.

После работы с камерами Горяева следует выполнить их дезинфекцию одним из допустимых способов:

  1. Погружение в 70%-ный раствор этилового спирта на 30 минут
  2. Погружение в 4%-ный раствор формалина на 60 минут при комнатной температуре.

Приведем примеры применения камеры Горяева и некоторые формулы.

Практическое применение камеры Горяева

Прежде чем приступить к проведению лабораторных исследований, рекомендуется тщательно протереть камеру Горяева небольшим кусочком чистого бинта, слегка смоченного в спирте. Мы не советуем использовать для этих целей вату, так как она может оставить волокна. Таким же образом следует обработать и покровное стекло для камеры Горяева.

Учтите, что при использовании низкокачественного спирта на поверхностях может образоваться осадок, тем или иным образом мешающий проведению исследований. Чтобы избежать появления связанных с этим явлением нежелательных эффектов, рекомендуется дополнительно протереть камеру и покровное стекло чистым марлевым шариком без спирта.

Притирание покровного стекла к камере должно быть выполнено очень тщательно до появления на месте контакта радужных колец (так называемых, цветных колец Ньютона) с обоих краев.

Для лучшего притирания можно воспользоваться одной хитростью и слегка выдохнуть воздух на камеру и покровное стекло, так чтобы небольшое количество влаги сконденсировалось на поверхностях стекол, что обеспечит лучший контакт.

При отсутствии специальных покровных стекол, прилагающихся к камере Горяева, можно использовать обычные стандартные покровные стекла.

Помимо целевого использования камеры Горяева для подсчета форменных элементов крови и т.п., данное стекло может расцениваться как своеобразный эталон для определения увеличения микроскопа. Для этого следует воспользоваться следующей формулой:

X=(p1-p2)/(a*N)

где X – это увеличение микроскопа; p1 – положение левой границы клетки камеры Горяева; p2 – положение правой границы клетки или группы клеток; N – количество клеток между измеряемыми границами; a – размер клетки камеры Горяева (равен 0,05 мм).

Камера Горяева также используется для подсчёта количества клеток в культуре.

Для подсчета клеточных элементов в жидкостях, содержащих их в меньших концентрациях, используются аналогичные по конструкции камеры Фукса-Розенталя и Нажотта, имеющие большую глубину – 0.2 мм и 0.5 мм соответственно.

Эти же камеры используются в альгологии для количественного учета фитопланктона. Часто камера Фукса-Розенталя используется для подсчета форменных элементов спинномозговой жидкости.

В отличие от камеры Горяева, большие квадраты сетки Фукс-Розенталя не разграфлены и сгруппированы по 16 квадратов, причем каждая такая группа ограничена тройными линиями.

Подсчет форменных элементов крови

Наиболее часто камеры Горяева используются именно для определения форменных элементов крови при проведении лабораторных исследований. Так для подсчета эритроцитов кровь необходимо развести в 200 раз, лейкоцитов – в 20 раз. Количество форменных элементов (ФЭ) в 1мкл крови определяют по формуле:

N=m*4000*s/q,

где N – искомое количество ФЭ в 1 мкл крови; m – число ФЭ в определенном количестве малых квадратов; q – количество малых квадратов сетки камеры Горяева, в которых подсчитывались ФЭ, s – степень разведения крови.

Формула для подсчета эритроцитов

Для подсчета эритроцитов используются 5 больших или 80 малых квадратов сетки, расположенных по диагонали. Таким образом, получаем следующую формулу:

N=m*4000*200/(5*16)=m*10000

Формула для подсчета лейкоцитов

Для подсчета лейкоцитов можно использовать один из трех методов:

1. Лейкоциты считают в 64 больших (пустых) квадратах

N=m*4000*20/(64*16)=m*78,125≈m*78

2. ​Лейкоциты считают по всей сетке в 169 больших квадратах (рекомендуется для образцов крови с выраженной лейкопенией)

N=m*4000*20/(169*16)≈m*29,6

3. Лейкоциты считают в 100 больших квадратах (64 пустых + 36 разграфленных квадратов по периметру сетки)

N=m*4000*20/(100*16)=m*50

Таблица нормальных значений:

Форменные элементы Норма
Эритроциты Мужчины 4 000 000 – 5 100 000 в 1 мкл
Женщины 3 700 000 – 4 700 000 в 1 мкл
Лейкоциты 4 000 – 9 000 в 1 мкл

Подсчет форменных элементов в мочевом осадке

Для определения ФЭ в мочевом осадке при анализах мочи по Нечипоренко, Аддис-Каковскому, Амбурже осуществляется по всей сетке Горяева и рассчитывается по формуле:

N=m/0.676,

где N – число ФЭ в 1 мкл осадка; m – число ФЭ, подсчитанных по всей сетке; 0.676 – объем камеры Горяева (мкл)

Галина Цехмистро

Источник: https://opticalmarket.com.ua/kamera-gorjaeva-prakticheskoe-primenenie.html

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева

Данный пробирочный метод состоит из следующих этапов:

  1. Пробирка заполняется уксусной кислотой с тиазиновым красителем на 0,4 мл. С помощью капиллярной пипетки берется 20 мкл свежей крови и выдувается в эту же пробирку. Полученная смесь тщательно смешивается.
  2. Тонкая стеклянная пластинка, находящаяся в камере, тщательно вытирается, после чего образуются радужные разводы.
  3. Далее берется капля полученного раствора из крови с уксусной кислотой и подносится к краю пластинки.
  4. Когда камера будет заполнена, ее не беспокоят в течение одной минуты, чтобы белые клетки крови начали оседать.
  5. При малом увеличении производится подсчет лейкоцитов.

Чтобы получить верные результаты, используют специальную формулу для подсчета количества лейкоцитов в 1 мкл крови. Нормой считается показатель от 4 до 9 на 10 л.

Если получился результат, превышающий данную отметку, то пациенту ставится диагноз — лейкоцитоз. Если наблюдается снижение – лейкопения. Но это в теории, на деле нужно смотреть и на другие показатели, чтобы точно определить заболевание.

Для подсчета лейкоцитов используют три вида формул:

N = m x 4000 x 20/(64 x 16) = m x 78.13 ≈ m x 78

N = m x 4000 x 20 / (169 x 16) ≈ m x 29.6

N = m x 4000 x 20 / (100 x 16) ≈ m x 50.

Камера Горяева – это прибор, который может наиболее точно подсчитать число лейкоцитов, а также других подобных частиц. В ее состав входит специальное толстое стекло с прямоугольной камерой. На ней расположена микроскопическая сетка и тоненькое оптическое стекло.

Этот аппарат разрабатывал известный профессор Горяев Николай Константинович, который трудился в Казанском университете. Его специфическая сетка давала наиболее точные результаты, чем камеры других известных ученых.

Что касается обслуживания камеры, то здесь тоже существуют свои нюансы. В перерывах от работы камера Горяева должна находиться в сухой зоне. Когда работа завершена, ее нужно обработать.

Для этого аппарат погружают в этиловый спирт (70%) на полчаса. Другой вариант очистки – это раствор формалина (4%) на один час.

Завершающим этапом становится промывка камеры Горяева дистиллированной водой и протирка мягкой тканью.

Существуют случаи, когда при низких показателях в организме пациента все в порядке. Это говорит о том, что основной резерв лейкоцитов находится в тканях. У таких людей предрасположенность к различным заболеваниям очень низка, поэтому они редко болеют. В основном это наследственность.

Методика подсчета лейкоцитов в камере Горяева, нормы показателей и отклонения

Камера Горяева – это приспособление для измерения числа клеток и частиц в определённом объёме жидкости (кровь, моча), состоящее из специального толстого предметного и покровного стёкла.

Предметное стекло имеет углубленную площадку посередине, на которую нанесена сетка из 225 больших квадратов. Из этих квадратов 25 равномерно разделены на 16 меньших квадратов. Благодаря такому объёму сетки подсчёт выполняется точнее, нежели в других ручных счётных устройствах.

Обслуживание камеры

После использования инструмента предметное стекло дезинфицируют путём погружения в 4% раствор формалина на час или в 70% раствор этилового спирта на полчаса.

После этого камеру тщательно промывают дистиллированной водой. Излишек жидкости убирают мягкой салфеткой.

Стоит обратить внимание на то, что камеру нельзя протирать ватным тампоном из-за цепляющихся к ней волокон. Хранится стекло в сухом месте.

Правило Егорова

Во время использования камеры в подсчитываются те ФЭ, которые располагаются внутри квадрата сетки и на верхней и левой линии его периметра. При этом частицы, касающиеся правой и нижней линии периметра во время расчёта данной клетки не включаются.

Норма лейкоцитов и отклонения

Норма лейкоцитов у людей составляет 4,0 – 9,0 × 10⁹/л. Или, по-другому, в 1 кубическом мм крови располагается примерно 6000 белых кровяных клеток.

На отклонения от нормы могут влиять внешние физиологические факторы:

  • приём пищи перед сдачей крови;
  • стресс;
  • беременность или менструация у женщин;
  • переохлаждение или перегрев;
  • большая физическая нагрузка перед сдачей анализов.

Если количество белых кровяных клеток превышает 9,0 × 10⁹/л (повышены лейкоциты), такое состояние называется лейкоцитозом. Подобную картину можно увидеть при злокачественных заболеваниях крови, инфекциях, поражениях радиацией и отравлениях.

Лекарственные препараты тоже способны увеличить количество лейкоцитов. Некроз тканей, обильные кровотечения, в том числе в результате операций, почечная кома, болезни сердца – всё это может привести лейкоцитозу.

Падение количества лейкоцитов ниже 3,9 × 10⁹/л называется лейкопенией. Однако у некоторых людей фиксируется постоянное число лейкоцитов в количестве 3,5 × 10⁹/л.

Принято считать, что у таких людей сохраняется резерв этих клеток в тканях в 50 раз больше, нежели в крови.

Еще встречается функциональная лейкопения после введения анальгетиков, сульфаниламидов и других лекарственных препаратов, после долгой мышечной работы, в результате поражения инфекциями и вирусами (тиф, грипп, корь).

Лейкоцитарная формула

Все виды лейкоцитов составляют лейкоцитарную формулу. По ней можно выявить определённые патологии. Нормы формулы меняются в зависимости от возраста и периода жизни человека. Сдвиг хорошо заметен у женщин во время беременности или после родов.

Применяются разные способы подсчёта соотношения видов этих клеток, но все они связаны с тем, что более тяжелые клетки (базофилы, например) располагаются ближе к краю мазка, а лимфоциты, как легкие клетки, остаются в середине.

  • Метод Филипченко. В данном способе подсчёт осуществляется по поперечной прямой границы одного конца к другому. Мазок при этом мысленно разделяют на три части.
  • Метод Шиллинга. Лейкоциты подсчитывают в четырех участках мазка.

Полученные данные записываются в таблицу. Индивидуально количество каждого вида белых клеток крови высчитывается по формулам. Отмечаются те элементы, которые попали в поле зрения. Счёт ведётся до того, момента, пока сумма всех подсчитанных клеток не составит 100.

Методика подсчёта лейкоцитов в моче

В моче подсчитывается количество лейкоцитов в камере Горяева по Нечипоренко. Этот анализ нужен для мониторинга заболеваний почек. Периодическое исследование мочи помогает проследить за правильностью лечения и эффективностью назначенной терапии.

Работа 4. Подсчет количества лейкоцитов в камере Горяева

Оборудование: микроскоп, камера Горяева, пипетка, капилляр от гемометра Сали, пробирка с резиновой крышкой.

Реагенты: жидкость Тюрка (100 мл 5%-го р-ра уксусной к-ты и 1 мл 1%-го р-ра генциан фиолетового или метиленового синего), спирт, иммерсионное масло.

Камера Горяева – толстое предметное стекло с четырьмя желобами в средней части, между которыми находятся три узкие площадки, средняя из которых ниже боковых на 0,1 мм и разделена пополам поперечным желобком. По обе стороны от этого желобка расположены сетки, нанесенные на стекло.

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 расчерчены вертикальными и горизонтальными линиями на 16 малых квадратов. Подсчет лейкоцитов ведут в счетной камере Горяева под малым увеличением микроскопа в 100 неразграфленных больших квадратах.

Большой квадрат равен 16 малым, что соответствует 100 х 16 = 1600 малым квадратам. Единицей отсчета является маленький квадрат. Его сторона равна 1/20 мм, площадь 1/20*1/20=1/400 мм2.

Объем крови, помещающейся над маленьким квадратом, равен 1/400 мм2*1/10 мм=1/4000 мм3 (1/10 мм – высота слоя крови). из 225 больших квадратов

Источник: https://zdorovo.live/krov/metodika-podscheta-lejkotsitov-v-kamere-goryaeva.html

Поделиться:
Нет комментариев

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.